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Rapid kit assay 결과 리포트

저작시기 2014.05 |등록일 2014.11.03 한글파일한글 (hwp) | 5페이지 | 가격 2,000원

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험이론
4. 실험결과
5. 실험고찰

본문내용

실험제목 : 항체 생산 설명 & ELISA 실험

실험목적 : 항원, 항체와 효소를 이용한 ELISA 실험을 이해하고, 이를 이용해 항원의 양을 정량해본다
실험이론

<중 략>

H2O2는 2H2O2->2H2O+ O2반응을 일으킬 수 있기 때문에 이 용액은 조교님이 바로 만들어주신 것을 사용해, 과정을 빠르게 진행하였다. 여기서 sodium acetate은 pH 5.1로 HRP가 반응 할 수 있는 적정 pH를 맞춰준 것이라 예상된다. HRP는 H2O2를 사용하여 TMB를 산화시킨다. 이 과정에서 oxidated TMB는 파란색을 띤다. 미리 wall에 항체를 코팅해놓았으므로 항원을 넣고 washing을 거치면 이 항체에 부착된 항원만이 떨어져 나가지 않을 것이다. 그러면 HRP와 결합된 항체를 넣었을 때 남아있는 항원에 이 항체가 샌드위치처럼 붙게 되고, 또 washing을 거치면 wall에 붙어있는 항체에 붙은 항원과 complex를 이룬 항체-HRP가 남게 되는 것이다. 여기에 50mM sodium acetate +1% TMB + 3% H2O2용액을 넣으면 남아있는 HRP가 TMB를 산화시키므로 우리는 TMB가 산화된 정도, 즉 푸른색을 얼마나 보이느냐로 항원의 양을 알 수 있는 것이다. 충분한 반응을 위해 실온에서 11시 38분에서 53분까지 15분가량 두었다. 15분 후에 관찰 결과, 0ng/ml에서 1ng/ml까지는 거의 반응을 하지않은 듯 그대로 투명했고, 10ng/ml은 조금 하늘색을 100ng/ml와 1000ng/ml은 진한 파란색을 나타냈다. 육안으로 보면 100ng/ml이 1000ng/ml보다 조금 진했다. 그리고 2M H2SO4를 50ul/wall씩 넣어주어 반응을 정지시켰다. 앞선 실험에서처럼 파란색이 진할수록 황산을 넣었을 때 나오는 노란색도 진한 것을 관찰할 수 있었다.

참고 자료

실험동물의 질병관리, 박재학, 서울대학교출판부, 2006.04.05
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