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Alkaline lysis를 이용한 preparation of plasmid DNA 실험 관련 예비, 결과 레포트 입니다.

저작시기 2012.09 |등록일 2014.10.15 한글파일한글 (hwp) | 5페이지 | 가격 1,000원

목차

1. 실험 목적
2. 이론
3. 실험 기구 및 장치
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 결과 분석
7. 건의사항
8. 참고문헌

본문내용

원형의 plasmid DNA를 추출하여 정제하는 기술을 터득한다.

2. 이론
ⅰ) Plasmid DNA
Plasmid는 세균세포의 염색체와는 별도로 스스로 복제할 수 있는 원형의 DNA이다. 플라스미드는 원형의 DNA분자로 세균의 염색체와는 별개로 독립적으로 복제한다. 플라스미드는 세균성 숙주세포에서만 증식한다. 이들은 자신의 생활 주기를 관리하는 유전자를 가지고 있고, 보통 숙주세포의 특성에 영향을 주는 유전자도 있을 때가 있다. 이러한 특성은 plasmid마다 매우 다르고 가장 잘 알려진 것이 다양한 항생제에 대한 내성이다. 플라스미드의 독특한 특성 때문에 이들은 분자 생물학에서 매우 가치가 있으며 유전공학에서 유전자를 옮길 때 vector로 사용한다.

ⅱ) Alkaline lysis (denaturation) methodDNA 와 plasmid의 고유 형태구조 원리에 의한 분리 방법으로써 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix를 형태를 가지는 반면 plasmid는 supercoiled형태를 가짐으로써 PH의 변화에 따라서도 plasmid의 형태 와 구조가 크게 변하지 않아 순수한 plasmid만을 추출하는 구조적 기본원리에 의한 방법이다.
plasmid DNA isolation은 주로 minirep이라고 부르는 소량 분리법을 이용한다. 이 방법은 plasmid를 지니는 세포를 액체배지에서 배양하여 수확하고, cell extract를 하면 된다. 여기서 extract는 단백질을 제거하고 에탄올 침전으로 DNA를 응축시킬 수 있다.
세포로부터 plasmid DNA를 소량으로 분리하는 방법은 대표적으로 Alkaline lysi rep, boiling method, Lithium minirep등이 있는데, 우리 실험에서는 Alkaline lysis를 이용한다.
Alkaline lysis의 기본적인 원리는 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다. 이때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다.

참고 자료

김영희 / 분자생물학 실험서 / 월드사이언드 / 2008 / p66~74
Brown T. A. / 유전자 클로닝과 DNA 분석 5th. / 월드사이언스 / 2008 / p14~46
http://blog.naver.com/vition/110075076064
http://blog.daum.net/yacsi2/5890634
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