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생물화학공학실험 Restriction of DNA

저작시기 2014.06 |등록일 2014.06.28 한글파일한컴오피스 (hwp) | 3페이지 | 가격 1,100원

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion

본문내용

1. Abstract
제한효소를 이용하여 DNA를 자르고, 잘려진 DNA 단편을 전기영동을 이용하여 크기 분석을 하는 실험이다. 주어진 조성으로 반응용액을 만든 후 일정한 온도(37℃)에서 반응시켜 준다. 그 후 TAE buffer를 넣고 전기영동법을 이용하여 제한효소를 처리한 DNA와 처리하지 않은 DNA의 크기를 비교해 본다.

<중 략>

2) 실험방법
(1) 반응 용액을 만든 후 10μl pipette으로 섞어준다.
(2) 37℃에서 1시간 반응한다.
(3) 전기영동기기에 Agarose gel을 넣고 0.5ⅹTAE buffer를 잠길 때까지 채운다.
(4) Agarose gel의 첫 번째 홈에 DNA ladder 2μl를 loading한다.
(5) loading star (6X) 2μl와 반응한 DNA 10μl를 섞은 뒤 두 번째 홈에 loading한다.
(6) 대조군으로, loading star 2μl와 반응하지 않은 DNA 10μl를 섞은 뒤 세 번째 홈에 loading한다.
(7) 25분 동안 전기영동을 한다.

<중 략>

4. Discussion
Restriction을 전체적으로 요약해보면 PCR을 이용하여 대량으로 복제한 DNA Plasmid를 제한효소를 이용하여 필요한 부분을 자르는 것이다.
이렇게 잘려진 DNA를 전기영동법을 이용하여 확인하는 것 까지가 이 실험의 마무리가 되겠다. EcoR1이란 제한효소는 균에서 얻어지고 나머지 모든 제한효소도 균에서 주로 얻어진다. 또한 primer나 polymerase와 같이 제한효소마다 최적의 온도가 다르다. 제한효소의 형태에는 두 가지가 있는데 type1과 type2가 되겠다. type1은 특별한 서열을 인식하고 target지역 이외를 자르고 type2는 인식한 범위 내 에서만 자른다. type2가 두 개의 단일 가닥을 자르게 될 때 두 가지 형태를 띠게 되는데 중심이 잘려 대칭을 이루는(blunt end)와 중심이 아닌 주변이 잘리게 되는 경우(sticky end)가 두 형태이다.

참고 자료

없음
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