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Plasmid DNA 분리와 사용 시약

저작시기 2010.12 |등록일 2013.03.12 한글파일한글 (hwp) | 3페이지 | 가격 500원

목차

1. Plasmid DNA 분리의 원리
2. Plasmid 분리에 사용하는 시약

본문내용

Plasmid DNA 분리의 원리
주로 miniprep이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 여러가지 방법이 있지만, 여기서는 가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkali lysis method를 소개할 것이다. 기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것입니다.
이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다.

<중 략>

EDTA는 세포벽의 integrity를 유지하는 데 필수적인 calcium ion을 제거하여 세포벽이 군데군데 무너지게 한다. 이때 glucose는 삼투압을 유지시켜 세포의 외형을 유지시켜 준다. 뒤에서 설명하겠지만, 이 과정에서 실험상 vortex를 해야 하는데 이때 세포가 완전히 깨지게 되면 chromosomal DNA가 잘게 깨지게 되어 plasmid DNA와 구분할 수 없게 된다. 따라서 이렇게 세포를 유지시켜가면서 세포벽만 깨는 것이다.

② Solution II
0.2 N NaOH
1% SDS (sodium dodecyl sulfate)

참고 자료

없음
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