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Specific activity and enzyme kinetics of alkaline phosphatase

저작시기 2012.07 |등록일 2012.11.24 | 최종수정일 2013.12.08 한글파일한컴오피스 (hwp) | 8페이지 | 가격 1,500원

소개글

실험레포트

목차

I. Title
II. Object
III. Introduction
IV. Materials & Equipments
V. Methods
VI. Result
VII. Discussion
VIII. Reference

본문내용

I. Title : Specific activity and enzyme kinetics of alkaline phosphatase

II. Object : 효소의 활성을 흡광도를 이용하여 측정하는 방법과 specific activity의 개념을 이해하고, 효소반응속도론(enzyme kinetic)에서 기본이 되는 Michaelis-Menten equation과 Lineweaver-Burk equation을 이용하여 효소활성의 척도가 되는 Michaelis constant(Km), 최대속도(Vmax), turnover number(Kcat) 등을 실험적으로 측정할 수 있다.

III. Introduction
- Spectrophotometer
일반적으로 빛이 물체와 만나면, 물체의 표면에서 반사되거나 물체에 흡수되거나 물체를 통과한다. 이 중 빛의 흡수현상을 이용하여 시료 용액 중의 빛을 흡수하는 화학물질의 양을 정량할 수 있다. 주로 자외선이나 가시광선 영역에서의 빛의 흡수되는 정도를 측정하는데 빛이 시료를 통과하게 되면 일부 흡수되기 때문에 빛의 광도가 달라짐을 이용한다. 물체에 흡수되는 빛의 양은 흡광물질의 농도마다 다르기 때문에 흡광도를 통해 흡광물질의 농도를 알 수 있다.

<중 략>

- AP의 정제효율이 높지 않은 이유?
애초에 AP정제가 제대로 되지 않아서 즉, 정제 과정에서의 오류가 있었을 수도 있다. 또한 AP단백질 분해와 변성이 일어났을 가능성도 있다. AP단백질을 얻고 나서 이번 실험을 하기까지 시간이 오래 지났기 때문에 아무리 온도조절을 해서 보관한다 하더라도 단백질 변성이 이미 시작되었을 가능성이 있다. 다른 가능성으로는 AP의 specific activity측정 과정에서의 오류가 있었을 수도 있다. 즉, 기질 PNPP가 AP에 의해 분해되어 PNP로 변하는 반응이 충분히 일어나지 않았을 수도 있다. 이 실험에서는 5분동안 상온에서 반응시켰는데 이 반응시간이 충분하지 못했을 수도 있다. 혹은 효소 즉, AP의 농도 변수가 다양하지 못해서일 수도 있다. 우리는 50mM, 100mM, 150mM 라는 3개의 sample농도로만 실험했기 때문에, 농도를 더 다양하게 세분화해서 측정하면 더 높은 정제효율을 얻을 수 있었을 것이다.

참고 자료

http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=434730
http://kin.naver.com/qna/detail.nhn?d1id=11&dirId=1116&docId=121311960&qb=7Zqo7IaMIHNwZWNpZmljIGFjdGl2aXR5&enc=utf8§ion=kin&rank=2&search_sort=0&spq=0&pid=gJKZ835Y7vlssvPdnRsssc--065945&sid=T7L61xjhsk8AAD37Ers
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