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DNA concentration measurement

저작시기 2010.04 |등록일 2010.04.04 한글파일한글 (hwp) | 5페이지 | 가격 2,000원

소개글

DNA의 농도를 측정하고 전기영동(gel electrophoresis)과정을 실험으로 접함.

목차

Introduction
Material
Result
Discussion
Reference

본문내용

Introduction
DNA와 RNA같은 Nucleic acid는 260nm의 파장을 흡수하기 때문에 spectrophotometer를 이용하여 solution 상에 존재하는 nucleic acid의 양, 즉 농도와 같은 정량적인 분석이 가능하다.[1]
수식으로 표현된 Beer Lambert의 법칙을 보면 특정 물질의 흡광도와 extinction coefficient를 알고 있다면 해당물질의 농도를 구할 수 있다.
그 예로써 double-stranded DNA가 260nm파장영역에서 가지는 평균 extinction coefficient가 0.020이고 (single-stranded DNA와 RNA 의 경우 0.027 ) optical density (OD)가 1이 될 때, double-stranded DNA의 농도는 50μg/ml의 값을 가짐을 알 수 있다.[2]
제한효소라고 알려져 있는 restriction enzyme은 bacteria와 archaea가 virus에 감염됐을 때 viral nucleic acid를 sequence specific하게 잘라냄으로써 virus의 침입을 막아내기 위한 수단으로 사용되는 것으로 이것의 발견으로 인해 분자생물학과 생물공학의 지대한 발전을 가져왔다.
DNA가 가지는 화학적인 구조를 보면 back bone을 연결하는 phosphate는 전체적으로 (-)charge를 띄고 있기 때문에 전자기장을 걸어주면 (+)charge로 이동하려는 성질을 가지고 있다. 또한 size에 따라 gel상에 이동하는 속도가 다르기 때문에 gel-electrophoresis를 이용해 크기별로 분리가 가능하다.
이번 실험에서는 UV-spectrophotometer를 이용하여 unknown DNA의 농도를 구해보고 restriction enzyme(XbaⅠ)으로 unknown sample digestion을 수행하여 그 결과를 gel-electrophoresis를 통해 확인해보고자 한다.

참고 자료

1. Sambrook and Russell (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd ed.). Cold Spring Harbor Laboratory Press.
2. Arber W, Linn S (1969). "DNA modification and restriction". Annu. Rev. Biochem. 38: 467–500. doi:10.1146/annurev.bi.38.070169.002343. PMID 4897066.
3. Krüger DH, Bickle TA (September 1983). "Bacteriophage survival: multiple mechanisms for avoiding the deoxyribonucleic acid restriction systems of their hosts". Microbiol. Rev. 47 (3): 345–60.
4. New England Biolabs product 1kb DNA ladderhttp://www.neb.com/nebecomm/products/productN3232.asp (2010.04.04)
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