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Bradford 시약을 이용한 단백질 정량 분석

저작시기 2009.06 |등록일 2010.03.28 워드파일MS 워드 (doc) | 3페이지 | 가격 800원

소개글

Bradford 시약을 이용한 단백질 정량 분석과 결과 판독

목차

실험 방법
실험 결과

본문내용

원리: 분광광도계로 단백질의 농도를 측정할 때, BRADFORD시약 속의 염료인 CBB G-250 시약(Coomassie Brilliant Blue)이 단백질과 결합하기 전(465nm)과 결합한 다음 (595nm)의 최대 흡광도 영역이 달라지는 원리를 이용하여 단백질 정량을 측정하는 방법이다.
거의 단백질 농도가 높을수록 분광광도계에서 얻은 O.D. 도 높아진다.

시약: BRADFORD reagent(SIGMA)
Protein: 1. bovine serum albumin (BSA: 농도를 아는 표준 단백질)
2. E.coli cell extract (측정용 단백질)
PBS buffer: phosphate buffered saline (단백질 희석 완충액)
장비 및 소모품: spectrophotometer, 1.5ml tubes, pipette, tips, cuvette(빛이 투과할 수 있도록 고안된 용기)

실험 방법
1. PBS 완충액으로 단백질을 6배 희석법으로 희석한다.
① Sample. 600㎕ (BSA 100㎕ + PBS 500㎕) 1/6 dilution
② PBS 500㎕ + BSA 1/6 dil. 100㎕
③ PBS 500㎕ + BSA 1/36 dil. 100㎕
④ PBS 500㎕ + BSA 1/216 dil. 100㎕
2. PBS/ 단백질 혼합액과 동량의 Bradford 시약(1/2희석액)을 넣어 혼합하여, 5분간 정치한다. 기다리는 동안 각각의 sample의 색깔 차이를 확인할 수 있다. 1번 샘플은 맑고 파란색, 2번은 남색, 3번은 옅은 먹색, 4번은 짙은 먹색 등으로 색깔이 각각 다르게 나왔다.
3. 분광광도계를 미리 작동시켜 예열한 다음 지정된 파장(595nm)에서 측정한다
4. 정량곡선을 그려 표준선으로 사용한다.
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