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PCR의 원리 및 활용

저작시기 2010.03 |등록일 2010.03.26 파워포인트파일MS 파워포인트 (ppt) | 23페이지 | 가격 1,800원

소개글

PCR의 원리 및 활용에 관한 발표 PPT 자료입니다.

목차

1.PCR 정의
2.PCR 과정
3.PCR 종류
4.PCR 홀용

본문내용

2. PCR의 과정 (디자인 과정)
target DNA 부분의 결정
Primer design & 합성
목적에 따른 PCR용 DNA polymerase의 선택
주형 DNA의 준비
Primer set에 대한 Tm 값을 계산
PCR 조건의 결정
(reaction temp., 시간, and cycle 수 등…)
PCR 수행

2. PCR의 과정 (디자인 과정-주의사항)
1. Primer 길이 : 18-24 mer (nucleotides) – 길이가 길수록 specific 함.
2. Primer의 Duplex stability
두 primer의 Tm 값이 동일하면 최적, 최소한 두 primer의 Tm은 5도 이하가 되도록 디자인.
두 Primer 가 annealing 되는데 중요함.
3. Non-complementary primer pairs

두 primer 사이에 상보적인 서열에 의하여 상보적인 결합이 안 되도록 디자인 한다.

특히 두 primer의 3’ 말단이 서로 상보적이면 primer dimer가 형성되어 PCR이 잘 안됨.

4. No hairpin loops

각 primer 내에서도 상보적인 서열로 인한 hair-pin 구조가 형성되지 않도록 디자인 한다.

이는 primer가 주형 DNA에 annealing되는 것을 방해하여 PCR 효율을 떨어뜨린다.

5. Annealing Temperature (AT) : Primer sequence에 근거하여 값이 정해짐.
AT = Tm – (4~6 ℃)
Tm = [4 x (G + C)] + [2 x (A + T)]
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