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단백질 정제(예비).

저작시기 2008.10 |등록일 2009.05.31 한글파일한컴오피스 (hwp) | 8페이지 | 가격 500원

소개글

기본적인 bacteria culture 방법 및 단백질 정제 방법을 익힌다.

목차

◆ 실험 목적
◆ 실험 재료
◆ 실험 원리

본문내용

◆ 실험 재료

․ LB broth
실험실에서 가장 흔히 사용되는 배지이다.
균 배양 실험에 가장 흔히 쓰이는 LB배지는 Luria - Bertani media 에서 머리글자만 따온 것이다. 배지를 구성하는 물질 조성비율은 tryptone 10g/liter, NaCl 10g/liter, yeast extract 5g/liter 인데, 간단히 LB배지에는 트립톤과 이스트, 염화나트륨이 함유되어 있다고 보면 된다.
LB배지는 이 세 가지 물질을 증류수에 넣어 녹여 만드는 것인데, 요즈음에는 이 시료들을 따로 양을 재서 섞고 만들지 않아도 된다. 이미 약품회사에서 완제품을 판매하고 있기 때문에 그 것을 증류수와 섞어주기만 하면 된다. LB가루를 물(오로지 증류수만 쓴다)에 섞을때는 물 1L에 가루 25g이라는 철칙이 따른다. ( 1L = 1000ml ) 성분 950 ml를 증류수에 녹인 후 pH를 7로 맞추기 위해 5 N NaOH를 첨가(약 200 μl)하고 증류수로 1 liter로 채운다음 autoclave한다.

․ 발현유도체 (IPTG)
IPTG는 Lactose 대신 inhibitor와 결합하지만 분해되지 않는다.
X-Gal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside)은 lactose 대신 beta-galactosidase에
의하여 대사되는 물질이다. 일종의 변형된 galactose sugar로서 원래 무색이지만 beta-galactosidase에 의하여 대사되면 푸른색을 낸다. 따라서 LacZ의 MCS에 DNA가 재조합되지 않은 박테리아의 colony는 LacZ가 제기능을 발휘하여 X-Gal을 대사시키므로 푸른색이
되고, DNA가 재조합된 박테리아의 conony는 LacZ가 망가져서 기능하지 않아 X-Gal이 그대로 남아 있어서 흰색 colony가 된다. 이렇게 색깔의 차이로 DNA가 plasmid 에 들어가서 세포 내에서 증폭되어 기능하는지 알 수 있다.

참고 자료

- 생물학-생명의 과학, 로버트 A. 월리스, 을유문화사, 1993, pp.81~90.

- < 특집 : 단백질식품 > 단세포단백질생산의 현황과 문제점, 민태익, 한국식품과학회 1978, pp.total.

- 균류학개론, Deacon, J. W., 1996, pp.50-69.

- 효모의 생물학 현대생물학신서 17, 현대생물학신서간행회, 대광문화사, 1993, pp.122-124.

- 단백질 대사, 김해리 최정희, 서울대학교출판부, 2001, pp.111-116, 120-122.

- 분자생물학, David Freifelder, 아카데미서적, 1999, 216-219.

- `Conformational Diseases of special interest`, R W. Carrell and D. A. Lomas, Lancet, 1997,
pp.134-138.

- 생명공학실험1, 아주대학교, pp.27-30.

- 유전자 클로닝 입문, 강종백 외 4, 월드 사이언스 , 2004, pp.92-95.

- E. coli Plasmid Vectors : Method and Application, Humana Press, 2003.

- Bacillus subtilis로부터 ampicillin 저항성을 지니는 plasmid의 분리 및 특성 분석
( Isolation and Characterization of Ampicillin - Resistant Plasmid in Bacillus Subtilis),
이희명 이형범, 한국유전학회, 1986.
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