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genomic DNA 추출(extraction or preparation)과 southern blotting (서던 블랏)

저작시기 2009.05 |등록일 2009.05.29 한글파일한글 (hwp) | 14페이지 | 가격 1,500원

소개글

bacteria와 plant, mammalian cell에서의 genomic DNA 추출법에 대해 원리, 프로토콜
southern blotting 원리, 프로토콜

14page

교수님께서 단순히 프로토콜(protocol)만 쓰지 말고 각각의 step이 가지는 의미, 그리고 어떤 시약이 쓰인다면 그 시약이 쓰이는 의미, 특정 온도에서 실험 하는 의미 등을 중요하게 다루라고 하셨기 때문에 그 부분에 있어 완벽 search가 된 리포트 입니다!! ^-^

목차

1). Extraction of genomic DNA
(from bacteria, plants, mammalian cells)

❉ genomic DNA prepatarion과 plasmid DNA preparation의 차이

1. from bacteria

2. from plants

3. from mammalian cells

4. 이후의 단계



2). Southern blotting

1. Restriction Enzyme digestion

2. Agarose Gel Electrophoresis

3. Processing the gel

4. Denatured DNA를 NC filter로 옮기기 (transfer)

Hybridization

본문내용

Genomic DNA와 plasmind DNA는 preparation 과정에서 서로 오염되기 쉽다. plasmid DNA preparation은 cell에 hole을 내어 plasmid를 꺼내는 과정이라 한다면, genomic DNA preparation을 위해서는 cell을 더 완벽히 깨야 한다. 또한 genomic DNA는 size가 커 purify가 어렵고, purify할수록 yield는 낮아지는 문제점이 있다. 따라서 genomic DNA preparation에는 어떻게 하면 genomic DNA에 physical한 손상을 입히지 않으면서 높은 yield로 얻어내느냐가 중요하다.
........................(중략)......................
② 제한효소를 2ul 넣고 37℃(적정 반응 온도)에서 1시간 반응시킨다.
◈ 효소의 양은 10units (1unit: 제한효소 1 unit는 1 μg의 DNA를 최적 온도에서 한 시간에 절단할 수 있는 양이다)
③ 70℃ water bath에 10분간 두어 반응을 정지시킨 후 ice에 보관한다.
◈ 효소의 종류에 따라 반응을 정지시킬 수 있는 온도는 다르다. 온도가 너무 높으면, 단백질(=효소)이 파괴되어 반응이 정지하게 된다.
④ agarose gel에 sample 일부를 넣어 DNA 절단 여부를 확인한다.
.......................(후략)..........................
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