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Exp.3. DNA mini prep

저작시기 2008.10 | 등록일 2008.11.03 한글파일 한컴오피스 (hwp) | 6페이지 | 가격 1,000원

소개글

대장균의 plasmid DNA를 분리하는 실험입니다.

목차

Introduction
Minipreps of plasmid DNA(플라스미드 DNA분리)
Discussion

본문내용

Introduction
Minipreps of plasmid DNA(플라스미드 DNA분리)
Bacteria cells로부터 plasmid DNA를 소량으로 분리하는 방법은 대단히 많지만 성공률과 속도를 생각하여 세가지 방법을 소개하면 boiling method, lithium-based procedure 그리고 Alkaline lysis prep이다.
(1) Boiling miniprep : plasmid를 지닌 bacteria는 lysozyme, Tliton(a nonionic detergent), 열처리 등으로 깨어질 수 있다. chromosomal DNA는 세포막에 결합된 상태로 남아있게 되고 원심분리로서 침전시켜 모을 수 있으며 plasmid DNA는 상등액에서 isopropanal(Homes and Quigley, 1981)로 침전시켜 분리할 수 있다. boiling miniprep는 적은양의 plasmid분리할 때 쓰이는 방법이지만 분리된 plasmid DNA는 alkaline lysis miniprep보다 quality가 떨어진다.
(2) Lithium miniprep :plasmid DNA는 평판 또는 액체배지에서 배양되는 E. coli로부터 획득할 수 있는데, bacteria cells은 Triton X-100/LiCl과 phenol/chloroform을 처리해야 한다. 이것은 plasmid DNA의 가용성화와 chromosomal DNA, cellilar debris 등에 침전을 일으킨다. debris는 원심분리를 통해 제거할 수 있다. 이러한 분리절차로 chromosomal DNA등을 제외한 plasmid DNA만을 얻을 수 있다. 분리방법은 가장 빠르게 plasmid DNA를 분리하는 방법이며 대부분의 생물학적 적용면에 이용할 수 있는 정제된 plasmid DNA를 분리할 수 있다.
(3) Alkaline lysis miniprep : alkaline lysis procedure (Bimboim, Doly, 1979)은 가장 일반적으로 쓰이는 분리방법이다. plasmid DNA는 plasmid을 지니고 있는 bacteria에서 적은 양의 배양으로 분리될 수 있다. Bacteria는 sodium dodecyle sulface(SDS) NaOH을 함유하는 용액으로 처리하여 용균되어 진다. (여기서 SDS는 bacteria proteins을 변형시키며 NaOH는 chrosomal DNA와 plasmid DNA를 변성시킨다.) 다음 potassiom acetate를 첨가하여 혼합액을 중성화시키는데 이것은 covalently closed plasmid DNA를 빠르게 reanneal 시킨다. chromosomal DNA와 bacteria proteins의 대부분은 침전되며(SDS는 potassium과 화합물을 이룬다.) 침전물은 원심분리로서 제거할 수 있다. plasmid DNA는 상등액에 남아있게 되고 ethanol precipitation으로 집중시킬 수 있다.

참고 자료

1. 장해영, 신분자유전학, 2001. 신일상사, pp211~213
2. http://apollo.mokpo.ac.kr/%7Esjkim/cgi-bin/technote/main.cgi/Plasmid_DNA
3. http://blog.naver.com/wandjina1/120023159845
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