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실시간 중합효소 연쇄반응법을 이용한 유전자 정량검사

저작시기 2008.05 |등록일 2008.05.22 워드파일MS 워드 (doc) | 12페이지 | 가격 3,000원

소개글

실시간 중합효소 연쇄반응법을 이용한 유전자 정량검사
Quantitative Assessment of Molecular Target
using Real-Time PCR

목차

서론
기존 PCR과 Real-time PCR과의 차이점
Real - time PCR 기법의 원리
Real-time PCR 정량원리
Real-time PCR 적용분야
결론

본문내용

1985년 Kary Mullis에 의해 개발된 중합효소연쇄반응법(PCR)은 대상 (target) 핵산 혹은 주형(template), DNA primer, Taq polymerase에 의해 대상 핵산을 증폭하여 대상 유전자의 존재 유무를 검출할 수 있는 방법으로 28내지 35 주기 후에는 105~ 106배로 증폭되는 민감한 방법이다(2). 특히 염색체 이상이나 특이 유전자의 이상을 동반하는 혈액 암 및 고형 종양에서는 대상 유전자를 PCR 법으로 증폭하여 진단과 치료 후 추적 검사에서 대상 유전자의 존재 유무를 통해 잔여 암세포의 존재를 확인하여 왔다(1~3). 그러나 일반적인 PCR법은 대상 유전자의 양을 정확하게 정량 할 수 없고, 때로는 응용된 방법으로 반정량 혹은 정량적 측정을 한다 하더라도 이로 인해 예민도가 떨어지고 시간이 오래 걸리며 오염의 가능성 등이 있어 유전자 정량에는 한계가 있다(4~6).
1992년 Higuchi 등이 기존 PCR의 비 정량적 측면을 보안하기 위해 ethidium bromide를 이용하여 UV를 조사하고 이때 발광하는 형광을 CCD카메라로 측정하는 방법을 개발하였고(7), 이후 이를 보완하기 위한 기술의 발전을 거쳐 유전자의 염기서열에 상보하는 탐식 유전자(hybridization probe)에 형광을 붙여 특이적으로 증폭 유전자의 양을 측정하는 방법을 개발하게 되었다(8~11).

기존 PCR과 Real-time PCR과의 차이점

일반적으로 기존에 사용하던 PCR의 반응 단계를 살펴보면 크게 세 부분으로 나눌 수 있는데 반응 초기 즉 log phase 혹은 exponential phase와 linear phase, 세 번째로 end-point 혹은 plateau phase로 나눈다(Fig.1).

참고 자료

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