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UV를 이용한 단백질 정량에 대한 실험 보고서

저작시기 2008.03 |등록일 2008.03.27 한글파일한글 (hwp) | 4페이지 | 가격 500원

소개글

생화학 실험- 단백질 정량법에 대한 실험 보고서 입니다(2007년에 작성)

목차

실험목적
실험원리
① UV 법
②Bluret법
③Lowry 법
④BCA법
⑤Bradford법
⑥분광광도계(UV-spectrophotometer)
⑦BSA(Bovine Serum Albumin)
실험기구 및 재료
실험 방법
결과 예측
참고 문헌

본문내용

EXP2. Protein Determination

실험목적
단백질 정량의 기본원리를 이해하고 Lowry법, BCA법, Bradford법 등의 차이점을 알바보자고 한다.

실험원리
단백질 농도를 정량하는 방법에는 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등이 등이 있다. 각각의 감도, 간편함, 단백질의 종류에 의한 감도의 차이, 방해물질의 종류와 허용 농도 및 반응액의 pH 등에 차이가 있으므로 측정할 대상에 따라 적당한 방법을 선택해야 한다.

① UV 법
단순히 단백질 용액의 흡관도를 분광 광도계로 측정하는 방법이다. 단백질에는 주로 tyrosin 및 tryptophan의 측소ㅔ로부터 유래된 280nm 부근의 흡수가 있으나 buffer에는 이부분의 흡수를 가지는 것이 적기 때문에 이것을 측정한다.
측정범위는 0.1~1㎎/㎖ 정도로서 간단하게 sample의 회수가 가능하지만 흡수는 tyrosine, tryptophan의 비율과 구조에 의존하기 때문에 흡광계수는 단백질에 따라 다르다. 따라서 흡광계수가 미리 알려져 있는 단백질의 농도를 결정할 경우, 또 chromatogrphy를 행한 뒤, 어느 부근에 어느 정도의 단백질이 용출되었는가를 대략적으로 조사할 경우에 적합하다. Column의 끝에 flow cell 식의 흡광도계(UV 모니터)를 붙이고 연속적으로 단백질의 요출 패턴을 monitor 하는 것이 가능하다.


②Bluret법
가장 고전적인 비색 정량법으로서 Alkali 성 조건하에서 Cu2+를 단백질용액과 반응시키면 Cu2+으로 되어 peptide 결합과 적자색의 complex를 형성하기 때문에 이것을 분광광계도로 측정한다.
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