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E. coli 배양방법

저작시기 2007.06 |등록일 2008.02.18 한글파일한글 (hwp) | 2페이지 | 가격 1,200원

소개글

자세한 결과분석, 디스커션을 원하시는 분께 적절합니다. 보고서 스타일입니다.

목차

1.실험제목
2.서론
3.재료 및 방법
4. 결과 및 토의

본문내용

3.재료 및 방법
▶재료
-Balance
-Weighing Paper
-휴지
-Spetula
-삼각플라스크
-Sodium Chloride(AMRESCO)
-Tryptone Powder(바이오세상)
-Yeast Extract(VENTECH BIO)
-Agar(DUCHEFA)
-DW
-매스실린더
-전자레인지
-키친랩
-Petri dish
-EP tube
-Incubator.
-Clean Bench.
-Plastic Loop
-Bacteria Cell (E.coli)
▶방법
1. Weighing을 하기 전에 Balance 위의 먼지를 제거하고 에어컨의 전원을 껐다. (매우 미세한 장치로써 주변의 바람이나 다른 이물질에 민감하므로 주의.)
2. Weighing paper를 대각선으로 두 번 접었다.
3. Weighing paper를 balance 위에 올린 뒤 영점을 맞추었다.
4. Agar 0.6g을 weighing 하여 weighing paper의 한가운데에 놓았다.(spetula사용, 반드시 weighing paper의 한가운데에 놓도록 하고, spetula끝을 손가락으로 톡톡 치면서 소량씩 떨어뜨려 정확히 양을 맞추었다.)
5. 사용한 spetula를 DW로 세척한 뒤 휴지로 한번 닦아주고 Tryptone 0.4g을 위와 같은 방법으로 weighing 하였다.(사용한 spetula 는 DW로 세척한 후 다음 시료를 취하였다. 오염방지)
6. Yeast extract 0.21g, NaCl 0.4g을 순서대로 weighing 한 후, 삼각플라스크에 위 4개의 시료를 부었다.(습도가 높아 특수코팅이 된 weighing paper임에도 불구하고 paper위에 시료가 묻어 있었다. 하지만 오차범위 내에 존재할 정도로 미량이었다.)
7. 40ml의 DW를 매스실린더를 이용하여 측정한 다음 시료가 들어있는 삼각플라스크에 넣었다.
8. 입구부분을 잡고 시료와 DW가 섞이게 살짝 흔들어 준 다음 입구를 키친랩으로 밀봉하였다.
9. 시료를 완전이 녹이고, 멸균하기 위해 밀봉한 삼각플라스크를 전자레인지에 넣어 약 1~2분간 돌려주었다. 이때 끓어서 넘치지 않도록 세심하게 살피면서 돌려주었다. (원래의 과정은 Autoclave 를 사용하여 완전 멸균하는 과정이나, 소량이라 전자레인지(Microwave)를 통해 가열과 멸균의 효과를 얻었다.)
10. 용액의 색이 투명하게 되면 전자레인지에서 시료를 꺼내어 클린벤치 안에 두었다.
11. petri dish를 준비하여 클린벤치 안에서 각각의 petri dish에 대략 20ml씩 부은후 약 10분간 식혀서 응고시켰다. (이때 손의 이물질이나 균이 클린벤치 안에 들어 갈 수 있으므로, 알코올로 손을 세척 후 시행하였다. 이 때 용액을 너무 오래 식힐 경우 삼각플라스크 안에서 응고 될 수 있으므로 주의하였다.)
12. EP-Tube내에 있는 희석된 E.coli 세균을 Plastic loop를 통해 소량 취한 뒤, 응고된 고체 LB배지에 spreading하였다. 처음에 왼쪽 부분에 세균을 spreading 한 뒤, 반 시계방향으로 90도 씩 petri dish를 돌려가면서 전 에 묻어있던 부분에서 세균을 끓어와 spreading 해주었다.(위의 모든 과정은 클린 벤치 안에서 시행하였다.)
13. spreading 을 마친 뒤, petri dish의 뚜껑을 닫고 37℃ incubator에서 약 18시간 배양한 뒤 증식 한 세균을 확인 하였다.

참고 자료

<도서>
약학대학협의회, 미생물-면역학 분과회, 2003, 신.종합미생물학 4th, 태광문화사 p369~372
<인터넷>
1.
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/bacterial_transformation.php
2.http://blog.naver.com/kjiy17?Redirect=Log&logNo=40013360307
3. http://blog.naver.com/killer3br?Redirect=Log&logNo=39054805
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