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PCR의 기본원리 및 그 응용성

저작시기 2008.01 |등록일 2008.02.06 한글파일한글 (hwp) | 3페이지 | 가격 500원

소개글

PCR의 기본원리 및 그 응용성

목차

1. 기본원리
2. 응용성

본문내용

1. 기본원리
DNA중합효소에 의해 DNA분자의 짧은 부위가 여러 번 복제되는 것

PCR은 DNA분자의 특정부위를 선택적으로 증폭시킨다. 어떤 DNA분자의 어떤 부위라도 선택될 수 있다. Border sequence들은 PCR이 수행되기 위해서 알려져 있어야 한다. 또한 두 개의 짧은 oligonucleotide가 이중나선의 각 가닥과 혼성화되어야만 한다. DNA합성반응을 위한 primer로써 역할을 하는 이들 oligonucleotide들은 증폭될 부위의 범위를 정해준다.
일반적으로 증폭반응은 Thermus aquaticus로부터 정제된 DNA polymerase I에 의해 수행된다. 이 생물체는 온천에서 서식하고 있고, Taq polymerase를 포함하는 많은 효소들이 thermostable하다. 이것은 그들이 열처리에 의한 변성에 대해 저항성이 있다는 것을 의미한다. Taq polymerase의 thermostability는 PCR methodology에서 필수적인 요건이다.
PCR증폭반응을 시작하기 위해, 그 효소를 primer가 결합된 DNA에 첨가하고 새로운 상보적인 가닥을 합성시키기 위해 반응시킨다. 그리고 나서 새롭게 합성된 가닥을 주형으로부터 분리시키기 위해 그 혼합액을 94℃로 가열시킨다. 그리고 primer들이 새롭게 합성된 가닥을 포함하여 각각의 위치에 혼성화되도록 하기 위해 냉각시킨다. 이제 Taq polymerase는 두번째 DNA합성반응을 수행하게 된다. Denaturation-hybridization-synthesis로 구성된 cycle을 반복 수행한다(대개 25-30번). 그 결과 증폭된 DNA 단편의 수많은 copy들이 합성된다. PCR실험의 마지막 단계에서, 반응 혼합액 시료를 agarose gel electrophoresis에 의해 분석한다. 단편이 증폭되어 생성된 충분한 양의 DNA를 EtBr염색 후에 band로써 확인할 수 있다. 이것은 그 자체로, 증폭된 DNA부위에 대한 유용한 정보를 제공할 수 있다. 또한 PCR산물은 정상적인 방법으로 조작된 plasmid 또는 bacteriophage vector내로 삽입되어 DNA sequencing같은 표준 기술에 의해 분석될 수도 있다.
Step 1 : primer, dNTP, 내열성 DNA polymerase를 mixture로 만들고, 목적으로 하는 두가 닥 DNA 단편을 denaturation 합니다. (94℃, 30 sec)
Step 2 : 열변성에 의해 생긴 한가닥 주형 DNA에 primer를 annealing한다. (50℃, 30 sec)
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