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PCR & Agarose gel 전기영동 & Gnee expression & Protein purification

저작시기 2007.01 |등록일 2007.05.31 한글파일한글 (hwp) | 3페이지 | 가격 1,000원

소개글

olymerase chain reaction(PCR) technique은 1980년대 중반 K. Mullis에 의해서 고안된 기술이다. 이 PCR techinique은 유전자를 연구, 분석하는 분자유전학에 혁신을 일으켰다. 유전자를 분석하고 연구하는데 있어서 가장 큰 문제점은 복잡한 전체 genome중에 연구하고자 하는 유전자가 희귀하다는 것인데, PCR은 특정 DNA Sequence의 copy수를 기하급수적으로 증폭시킬 수 있다.

목차

1.결과
2.고찰

본문내용

혼합된 PCR premix tube를 thermal cycler에 넣고 반응 시킨다.
GFP gene의 세포막을 화학적으로 깨기 위해서 계면활성제(2.5ml)를 넣고 shaking incubator에 넣고 15min동안 반응시킨다.
깨진 세포막을 제거하기 위하여 Centrifuge( 4℃, 20min, 4500RPM )에 넣어서 작동시킨다.

※PCR tube가 작은 이유는 높은 온도에서 낮은 온도로의 변화에 sample이 골고루 영향을 받을 수 있게 하기 위함이다.
*Agarose gel electrophoresis
60℃에 보관되어 있는 1.2%의 Agarose를 gel cast에 넣어 well을 만든다.

Template 2개를 2개씩 나누어 넣고 나머지 buffer를 넣는다. 섞을 때는 pipet에 용액을 넣었다 뺐다 하면서 섞는다. 10X DNA 로딩 버퍼(2)와 PCR실험에서 만든 GFP gene(5)를 섞어 well에 피펫을 이용하여 넣는다.
20분간 젤 영동 시키고, 염색과 탈색 후에 UV를 이용하여 확인한다.
700bp정도를 확인하였다.(염색:ETBR ,탈색 : DDW)
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