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Plasmid/DNA 분리정제 (결과)

저작시기 2006.01 |등록일 2006.10.26 한글파일한컴오피스 (hwp) | 4페이지 | 가격 500원

소개글

Plasmid/DNA 분리정제의 결과레포트 입니다.
열심히 조사했습니다^^

목차

Ⅰ. 결론
1) 결과
2) 고찰

본문내용

2) 고찰

이번 실험은 Plasmid/DNA 분리정제로 매우 어려운 실험이어서 그런지 조교누나와 함께 단계적으로 실험을 하였고, 또 실험을 이틀에 걸쳐 나누어 하였다.
첫 번째 날의 실험내용은 균을 배지에 접종한 뒤 그 균을 4시간동안 충분히 생장할 수 있도록 배양한 뒤 본격적인 실험이 시작되었다. 어떤 균들은 형질전환이나 형질도입에 의해서 들어온 다른 DNA를 분해하는데 그 원인이 핵산분해효소라는 제한효소 때문인 것으로 밝혀졌다. 이러한 핵산분해효소의 가장 중요한 특징은 특정 뉴클레오티드 서열만 절단한다는 것이다. 핵산분해효소를 통해 커다란 DNA 분자를 작은 조각들로 절단한 뒤 잘라낸 DNA를 균과 분리하여 DNA만을 따로 저장시키는 것이 첫 번째 실험의 완료였다.
두 번째 날의 실험내용은 저장시켰던 DNA를 폴리아크릴아미드 겔에 Size Maker와 함께 겔 속에 주입시켜서 전기영동을 시키는 것이었다. 우선은 여러 시약들을 정확한 량으로 제조하여 Gel을 만들어 굳혀 두었다. 그 뒤 전기영동장치를 이용하여 영동을 시켰는데, 여기서 중요한 점으로는 Gel판 양쪽에 전압을 걸어줄 경우 DNA는 음전하를 띄기 때문에 양극을 향해 가는데, 전류의 흐르는 방향을 양에서 음으로 흐르게 하는가? 음에서 양으로 흐르게 하는가?를 주의 깊게 확인한 뒤 전기영동을 시켜야 하는 것이었다. 만약 음에서 양이 아니라 양에서 음으로 전기를 흐르게 한다면 DNA들은 Gel이 있는 방향이 아니라 그 반대방향으로 퍼져나가게 되어 위와 같은 사진을 전혀 찍을 수 도 없게 되었을 것이다.
Gel 전기영동을 이용한 전기영동 방법은 EtBr을 사용하여 염색한 후에 UV를 조사하여 형광을 발하는 밴드를 관찰하는 방법으로써 간단한 방법이라는 장점이 있지만, DNA의 농도가 25ng 이상이어야 한다. 이렇게 전기영동을 한 뒤 3차 증류수로 헹궈준 뒤 UV판에 올려 사진을 찍으면 실험은 완전한 완료가 된다.
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