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Restriction Mapping of Circular Plasmid DNA and Transformation of ligated Plasmid DNA

저작시기 2006.03 |등록일 2006.10.20 한글파일한컴오피스 (hwp) | 10페이지 | 가격 1,300원

소개글

ligation한 plasmid를 이용하여, bacteria를 transformation하게 만든다. 또한 restriction mapping을 통해 미지의 DNA에서 제한효소 절단 부위의 상대적인 위치를 알아본다.

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출지 및 공동 실험자
4. 목적
5. 원리
* Agarose gel electroporesis
* Transformation과 Transfection의 차이점
* Restriction Mapping
6. 시약 및 기자재
1) Restriction Enzyme Digestion of Plasmid DNA
2) Agarose gel electrophoresis of digested fragments
7. 방법
1) Transformation
2) Restriction Map
8. 결과
1) Transformation 한 3개 plate에서 생긴 colony 수
2) Transformation efficiency
3) Restriction Map의 함수
4) Restriction Enzyme의 위치예측
9. 고찰
10. 참고문헌

본문내용

1. 실험제목

Restriction Mapping of Circular Plasmid DNA and Transformation of ligated Plasmid DNA

2. 실험일자

2006년 3월 20일

3. 제출지 및 공동 실험자

4. 목적

ligation한 plasmid를 이용하여, bacteria를 transformation하게 만든다. 또한 restriction mapping을 통해 미지의 DNA에서 제한효소 절단 부위의 상대적인 위치를 알아본다.

5. 원리
* Agarose gel electroporesis
다양한 방법의 전기영동법이 있지만 Agarose gel 전기영동은 DNA 조각을 분리하고 인식하는데 사용하는 가장 일반적인 방법이다. 이 기술은 간단하고 빠르며 다른 방식으로는 잘 안 되는 DNA 용해도 가능하다. 게다가 젤 안의 DNA 위치는 저밀도의 형광물질 EtBr을 착색시킴으로써 결정될 수 있다. 1∼10 ng 의 DNA도 이 자외선을 이용하여 감지할 수 있다. 원한다면 이 gel 안에서 나타나는 DNA 밴드들을 다양한 유전자복제 목적에도 이용할 수 있다. Agarose gel은 polyacrylamide gel 보다 낮은 분해도를 지니지만 보다 강력한 분 리능력을 지니고 있다. 50 kb에 가까운 200 b.p. 의 길이도 Agarose gel은 분리할 수 있다. Agarose gel은 투명하고 깨끗한 완충용액에 Agarose를 녹여서 얻을 수 있다. 녹은 것은 주조기에 부어지고 굳힌다. 굳는 동안 아가로스의 농축 밀도는 결정되는 것이다. 전기가 gel을 통과하는 동안 DNA는 양극으로 이동하는 것이다.

참고 자료

* 분자생물학, 심웅섭 외 6인, 월드사이언스, p386 ~ 387
* http://arbl.cvmbs.colostate.edu/hbooks/genetics/biotech/enzymes/maps.html
* http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=sGbMQdC7KtBTazp3r o7GLOvA5NVf7cwg
* http://blog.naver.com/tamiru/150001963648
* http://blog.daum.net/tts1950/3934396
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