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[DNA분리] 포유동물(mouse) 세포로부터 염색체 DNA 분리

저작시기 2001.10 |등록일 2005.06.26 한글파일한컴오피스 (hwp) | 10페이지 | 가격 500원

목차

1. Title: 포유동물(mouse) 세포로부터 염색체 DNA 분리
2. Date
3. Principle
4. Apparatus & Reagents
5. Procedure
6. Result
7. Discussion

본문내용

세포로부터 염색체 DNA를 분리하기 위해서는 먼저 DNA가 세포 밖으로 유출될 수 있도록 세포벽 및 세포막을 분해시킨다. 이때 DNA 가수분해 효소들의 활성을 억제하는 조건에서 DNA를 분리하며 단백질이나 RNA가 같이 회수되지 않도록 한다.
세포벽을 가지는 박테리아의 경우 먼저 lysozyme을 처리하여 세포벽을 분해시키며 세포막은 세척제인 SDS를 처리함으로써 분해시킨다. SDS는 세포막을 분해시킬 뿐 아니라 단백질을 변성시킬 수 있어 핵산 가수분해 효소들의 작용을 억제할 수 있다.
효소를 포함하는 세포 내 단백질들은 proteinase K에 의해 분해되고 분해된 단백질들은 phenol과 chloroform을 처리함으로써 제거할 수 있다. DNA는 알콜에 의한 침전으로 얻을 수 있다. 함께 분리된 RNA는 RNase에 의해 가수분해되어 제거되고 최종적으로 DNA만 얻는다.

5. Procedure
< 첫째날 실험 >
1) 온도 55℃에서 water bath를 유지시키고, centrifuge로 17000rpm, 4℃ 로 setting한다.
2) 쥐꼬리 0.5cm에 TES 500㎕와 pK 30㎕을 넣고 3-4기산 water bath에 방치한다.
3) sat. phenol 500㎕을 가하고, micro tube를 천천히 up-down한다.
4) 원심분리한다.
5) micro pipette에 끝을 자른 tip으로 상등액만을 취한다.
6) 상등액으로 3)~5)의 단계를 반복한다.

참고 자료

① handbook of chemistry and physics 6.7 edition, Robert C.
② Larry G. Scheve, 「기본생화학」, 학문사, 1993년, p485~487
③ 김수일 외 3인, 「생화학」, 문운당, 1995년, p223~254
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