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제한효소를이용한DNA절단

저작시기 2004.04 |등록일 2004.09.11 | 최종수정일 2019.06.07 한글파일한컴오피스 (hwp) | 28페이지 | 가격 3,000원

소개글

만점받은 보고서예요^^

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3.실험 기구 및 시약
4. 실험원리
4.1 PCR
4.2 전기영동
4.3 competent cell
4.4 유전자 재조합
4.5 형질전환
4.6 Ethidium Bromide
5. 실험 방법

본문내용

1. PCR의 원리
PCR법의 기본 원리는 다음과 같다.
첫 단계는 이중쇄 DNA를 단일쇄 DNA로 열변성(denaturation)시킨다. 두 번째 단계는 올리고 뉴클레오티드를 단일쇄 DNA에 결합(annealing)시키고 세 번째 단계는 결합한 올리고뉴클레오티드를 시발체로 하여 DNA 폴리머라제에 의해 DNA를 합성
(Extension)하여 이상의 과정을 일정한 싸이클동안 반복한다.
이론적으로 매 PCR 주기마다 증폭되는 DNA는 2배씩 늘어나야 하나 (n 싸이클 후는 2n개) 여러 가지 이유에서 일정 주기가 지나면 증폭되는 DNA의 양이 안정기(plateau)에 도달하게 된다. PCR로 증폭된 밴드를 에티디움 브로마이드(EtBr)로 염
색된 아가로스 젤(Agarose gel)에서 관찰하려면 약 50ng의 DNA가 필요한데 50ng은 300bp길이 DNA로 따지면 약 1011카피가 된다. 따라서 단일 copy의 300bp DNA를 증폭 후 전기영동하여 볼 수 있으려면 약 37 싸이클이면 (237=1011)된다. 그런데 1ug
의 게놈 DNA에는 단일 카피 유전자가 3X105 카피 정도 있다고 추정되므로 일반적으로 30-40 싸이클을 넘을 일은 거의 없고 보통 20-30 싸이클을 넘을 일은 거의 없고 보토 20-30싸이클이면 충분하다.

참고 자료

없음
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